眾所周知細胞培養基的種類繁多，細胞培養方式也較多，如何正確地使用培養基及*大程度地保持培養基的營養以維持細胞的生長，對每個培養者都很重要。培養基的使用依不同的培養基種類、培養方式、細胞種類的不同而存在差異。
在進行細胞培養操作之前呢，我們先來了解一些細胞的基本知識吧！
組織培養實際的保存會影響培養物的生長速度！
動物血清應儲存于–5至–20°C。培養基儲存于2至8°C；請在推薦的保質期內用完。請將完全培養基（加入添加劑）保存于2 至 8°C，推薦的存放期限為2至4周。此外，盡量減少血清和培養基暴露于光線下的時間。
細胞培養過程*重要的有兩點：一是無菌無污染；二是穩態環境。
無菌操作：無菌操作很重要，這對細胞培養影響很大。不要以為加入雙抗或三抗就可以了。雙抗或三抗的添加不僅對細菌或真菌的耐受性增加了，更容易染菌。其次抗生素添加的含量對細胞生命代謝是有一定的毒性作用的，尤其是在做轉染的時候。
那么無菌操作該怎么做才能盡可能的防止被污染？
首先是超凈工作臺的擺放已以及及時滅菌。里面應盡可能少擺放一些沒用的東西，比如槍頭、離心管等。工作臺內右邊擺放一瓶75%的酒精，左邊擺放一包無菌擦拭紙，15ml和50ml兩個管架，正前方擺放各量程的移液槍，以及一盞酒精燈。每次使用前后均用75%酒精噴灑，擦手紙擦拭，紫外含臭氧滅菌30min。
其次是操作過程的細節注意。將培養基經過75%酒精擦拭后放入工作臺的左邊，垃圾桶噴灑75%酒精后放在*右邊，槍頭噴灑75%酒精放于右中間，含有細胞的培養瓶75%酒精擦拭后放置于左中間，將酒精燈放于正中間并點燃，培養瓶打開過火放于酒精燈旁開始傳代或換液等操作。整個過程盡可能靠近火源，以*快的速度操作完。
*后培養箱每隔一段時間進行清洗消毒滅菌操作，保證培養環境無菌。
穩態環境的培養：培養基和血清的的選擇很重要，一般能用進口盡量選擇進口的。國內很多產品處理的效果不如國外的，對于原代細胞培養尤為重要。買來的培養基和血清應及時分裝以保證無菌。切勿使用37℃水浴加熱，應在4℃冰箱慢慢融化，避免影響血清的質量。血清*好使用胎牛血清，添加含量為10%，不宜過高，短時間可以，長時間容易毒害細胞造成細胞分化和衰老。
細胞培養過程不能過于頻繁換液，應隔3天左右更換或者培養基顏色變黃，所以應每天都去觀察細胞生長的狀態，及時處理。
拿到RAG小鼠腎腺癌細胞細胞后，應該注意什么？
收到RAG小鼠腎腺癌細胞細胞后先不要開蓋，放在培養箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察RAG小鼠腎腺癌細胞細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議對收細胞時的培養基拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況。
收到RAG小鼠腎腺癌細胞細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度：如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養瓶中培養液吸出，留下10ml培養液繼續培養，剩余培養液可與新配制的培養液按一定的比例混合使用，待細胞生長穩定后可替換成新配制的培養液；超過80%匯合度時，請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞，吸出培養液、1000轉/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。
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